Елан уында карбоксил эфир бәйләнешен гидролизлаучы ферментлар бар.Гидролиз өчен субстратлар - фосфолипидлар, ацетилхолин һәм хуш исле асетат.Бу ферментларга өч төр керә: фосфолипаз, ацетилхолинестераз һәм хуш исле эстераз.Елан агуларындагы аргинин эстеразасы синтетик аргинин яки лизинны гидролизлый ала, ләкин ул нигездә табигатьтә протеин пептид бәйләнешләрен гидролизлый, шуңа күрә ул протеазга карый.Монда каралган ферментлар эстер субстратларында гына эшли һәм бернинди пептид бәйләнешендә эшли алмый.Бу ферментлар арасында ацетилхолинестераз һәм фосфолипазның биологик функцияләре мөһимрәк һәм тулысынча өйрәнелгән.Кайбер елан уулары көчле хуш исле эстераз активлыгына ия, алар p-нитрофенил этил эфирын гидролизлый ала, а - яки П-нафталин асетат һәм индол этил эфиры.Бу эшчәнлекнең мөстәкыйль фермент яисә карбоксилестеразның билгеле бер йогынтысы белән ясалганы билгеле түгел, аның биологик әһәмиятен генә әйтмичә.Агкистродон халисы Японикусның угы р-нитрофенил этил эфиры һәм индол этил эфиры белән реакцияләнгәндә, p-нитрофенол һәм индол фенол гидролизатлары табылмады;Киресенчә, әгәр бу эфирлар кобра Жушан төрләре белән елан угы һәм Бунгар мультикинкус елан угы белән реакцияләсәләр, алар тиз гидролизацияләнәчәк.Билгеле булганча, бу кобра уулары көчле холинестераз активлыгына ия, алар югарыдагы субстратларның гидролизы өчен җаваплы булырга мөмкин.Чынлыкта, Мклеан һ.б.(1971) хәбәр ителгәнчә, Кобра гаиләсенә караган күп елан уулары индол этил эфирын, нафталин этил эфирын һәм бутил нафталин эфирын гидролизлый ала.Бу елан уулары килеп чыга: кобра, кара муенлы кобра, кара иренле кобра, алтын кобра, Мисыр кобра, патша кобра, алтын кобра мамба, кара мамба һәм ак иренле мамба (Д.
Елан угы метил индол этил эфирын гидролизлый ала, ул зарардагы холинестераз активлыгын билгеләү өчен субстрат, ләкин бу елан угы холинестераз активлыгын күрсәтми.Бу кобра уында билгесез эстераз барлыгын күрсәтә, ул холинестераздан аерылып тора.Бу ферментның табигатен аңлар өчен, алга таба аеру эше кирәк.
1 、 Фосфолипаз А2
(I) Гомуми күзәтү
Фосфолипаз - глицерил фосфатын гидролизлый ала торган фермент.Табигатьтә фосфолипазның 5 төре бар, алар фосфолипаз А2 һәм фосфолипаз
A., фосфолипаз В, фосфолипаз С һәм фосфолипаз Д. Елан уында нигездә фосфолипаз A2 (PLA2) бар, берничә елан агуларында В фосфолипазы бар, һәм башка фосфолипазлар нигездә хайван тукымаларында һәм бактерияләрдә очрый.3-11-4 нче рәсемнәрдә бу фосфолипазларның субстрат гидролиздагы эш урыны күрсәтелгән.
Фосфолипазлар арасында PLA2 күбрәк өйрәнелгән.Бу елан уында иң өйрәнелгән фермент булырга мөмкин.Аның субстраты - Сн-3-глицерофосфатның икенче позициясендә эстер бәйләнеше.Бу фермент елан ууларында, умарта ууларында, чаян ууларында һәм хайван тукымаларында киң очрый, һәм PLA2 дүрт гаилә елан агуларында мул.Бу фермент кызыл кан күзәнәкләрен сындыра һәм гемолиз китерә, ул шулай ук "гемолизин" дип атала.Кайбер кешеләр шулай ук PLA2 гемолитик лецитиназ дип атыйлар.
Людееке башта елан угы гемолитик кушылма ясый алуын, ферментлар ярдәмендә лецитин өстендә эш итә алуын ачыклады.Соңрак, Делезен һ.б.кобра угы ат сарысы яки сарысы белән эшләгәндә, гемолитик матдә барлыкка килүен исбатлады.Хәзер билгеле, PLA2 эритроцит мембранасының фосфолипидларында турыдан-туры эш итә ала, эритроцит мембранасы структурасын җимерә һәм туры гемолиз китерә ала;Ул шулай ук серумда яки гемолитик лецитин чыгару өчен лецитин кушып, кызыл кан күзәнәкләрендә турыдан-туры гемолиз җитештерү өчен эш итә ала.PLA2 елан агуларының дүрт гаиләсендә мул булса да, төрле елан агуларындагы ферментларның эчтәлеге бераз аерылып тора.Раттснак (С.
Елан угы зәгыйфь PLA2 активлыгын күрсәтте.3-11-11 таблицаларында Кытайдагы 10 зур агулы еланның PLA2 эшчәнлеген чагыштыру күрсәтелгән.
Таблица 3-11-11 Кытайдагы 10 елан ууларының фосфолипаз VIII эшчәнлеген чагыштыру
Елан угы
Май чыгару
Алифат кислотасы,
Cjumol / мг)
Гемолитик активлык CHU50 / ^ g * мл)
Елан угы
Май кислоталарын җибәрегез
(^ раол / мг)
Гемолитик активлык “(HU50 / ftg * 1111)
Нажаная атра
9. 62
унбер
Микрасефаль офис
биш балл бер нуль
калыспаллалар
8. 68
ике мең сигез йөз
gracilis
V, акутус
7. 56
* * #
Офиофаг ханна
өч нокта сигез ике
йөз кырык
Bnugarus fasctatus
7,56
ике йөз сиксән
B. multicinctus
бер нокта тугыз алты
ике йөз сиксән
Viper a russelli
җиде балл нуль өч
Т, былжыр
бер нокта сигез биш
Сиаменсис
Т. Стежнегери
0. 97
（2） Аеру һәм чистарту
Елан агуларында PLA2 эчтәлеге зур, һәм җылыту, кислота, алкалы һәм денатурант тотрыклы, PLA2ны чистарту һәм аеру җиңел.Гомуми ысул - башта чималда гель фильтрлау, аннары ион алмашу хроматографиясен үткәрү, һәм киләсе адым кабатланырга мөмкин.Әйтергә кирәк, ион алмашу хроматографиясеннән соң PLA2 туңдыру-киптерү агрегатка китерергә тиеш түгел, чөнки туңдыру-киптерү процессы системада ион көчен арттыра, бу PLA2 агрегатына китергән мөһим фактор.Aboveгарыдагы гомуми ысулларга өстәп, түбәндәге ысуллар да кабул ителде: ① Уеллс һ.б.P PLA2 субстрат аналогы якынлык хроматографиясе өчен лиганд буларак кулланылды.Бу бәйләнеш PLA2 белән Ca2 + белән елан уында бәйләнергә мөмкин.EDTA күбесенчә элуент буларак кулланыла.Ca2 + алынгач, PLA2 белән лиганд арасындагы якынлык кими, һәм ул лигандтан аерылырга мөмкин.Башкалар 30% органик эремә яки 6мол / Л карбамидны элуент итеп кулланалар.③ Гидрофобик хроматография PheiiylSephar0SeCL-4B белән кардиотоксиндагы PLA2 эзен бетерү өчен башкарылды.④ Анти-PLA2 антителасы PLA2-та якынлык хроматографиясен башкару өчен лиганд буларак кулланылды.
Әлегә күп санлы елан угы PLAZ чистартылды.Ту һ.б.(1977) 1975 елга кадәр елан ууларыннан чистартылган PLA2 исемлегенә кертелде. Соңгы елларда ел саен PLA2 аеру һәм чистарту турында күп санлы мәкаләләр хәбәр ителә.Монда без Кытай галимнәре тарафыннан PLA-ны аеру һәм чистартуга игътибар итәбез.
Чен uanанчонг һ.б..Аның токсиклылыгы буенча, нейтраль PLA2 агулы, ул презинаптик нейротоксин Агкистродотоксин дип билгеләнде.Кычыткан PLA2 аз агулы, һәм кислоталы PLA2 токсиклылыгы юк диярлек.Ву Сянфу һ.б.(1984) молекуляр авырлык, аминокислота составы, N-терминал, изоэлектрик нокта, җылылык тотрыклылыгы, фермент активлыгы, токсиклылык һәм гемолитик активлыкны кертеп, өч PLA2 характеристикасын чагыштырды.Нәтиҗә шуны күрсәтте: аларның молекуляр авырлыгы һәм җылылык тотрыклылыгы, ләкин башка якларында зур аермалар бар.Фермент эшчәнлеге аспектында кислота ферментлары активлыгы фермент активлыгыннан югарырак иде;Кычыткан ферментының гемолитик эффекты кызыл кан күзәнәкләренә иң көчлесе булды, аннары нейтраль фермент, һәм кислота ферменты гемолизланган диярлек.Шуңа күрә, PLAZның гемолитик эффекты PLA2 молекуласы корылмасы белән бәйле дип фаразлана.Чжан ingзинканг һ.б.(1981) Агкистродотоксин кристаллары ясадылар.Ту Гуанглианг һ.б.. -терминал билгеләнде.Ли uesшенг һ.б.(1985) Фуцзяндагы Viper rotundus агуларыннан тагын бер PLA2 изоляцияләнде һәм чистартылды.PLA2 * субуниты - 13 800, изоэлектрик ноктасы - 10,4, һәм конкрет эшчәнлек - 35 / xnioI / miri мг le Лекитин субстрат буларак, ферментның оптималь pH 8,0 һәм оптималь температура 65 ° C. LD5 тычканнарга венага кертелде.Бу 0,5 ± 0,12мг / кг.Бу фермент ачык антикоагулант һәм гемолитик эффектларга ия.Агулы PLA2 молекуласы 18 төр аминокислотаның 123 калдыкыннан тора.Молекула цистинга (14), аспарт кислотасына (14) һәм гликинга (12) бай, ләкин бер метионинны гына үз эченә ала, һәм аның N-терминалы серин калдыклары.Тугуан белән изоляцияләнгән PLA2 белән чагыштырганда, молекуляр авырлык һәм ике изоензимның аминокислота калдыклары саны бик охшаш, һәм аминокислота составы да бик охшаш, ләкин аспарт кислотасы һәм проол калдыклары саны бераз аерылып тора.Гуангси патшасы кобра елан уында бай PLA2 бар.Шу uanян һ.б..Электрон микроскоп күзәтүеннән төп PLA2-ның кызыл кан күзәнәкләренә тәэсирен күзәтеп була, аның кеше кызыл кан күзәнәкләре мембранасына ачык тәэсире бар, ләкин кәҗә кызыл кан күзәнәкләренә ачык тәэсире юк.Бу PLA2 кешеләрдә, кәҗәләрдә, куяннарда һәм Гвинея дуңгызларында кызыл кан күзәнәкләренең электрофоретик тизлегендә ачык тоткарлык эффектына ия.Чен һ.б.Бу фермент ADP, коллаген һәм натрий арахидон кислотасы китереп чыгарган тромбоцитлар агрегатасын тоткарлый ала.PLA2 концентрациясе 10 / xg / ml ~ lOOjug / мл булганда, тромбоцитлар агрегаты тулысынча тыела.Әгәр юылган тромбоцитлар материал буларак кулланылса, PLA2 20Мг / мл концентрациясендә агрегатны тыя алмый.Аспирин - циклоксигеназа ингибиторы, ул PLA2 тромбоцитларга тәэсирен тыя ала.PLA2 тромбоксан А2 синтезлау өчен арахидон кислотасын гидролизацияләп тромбоцитлар агрегатасын тоткарлый ала.Чжэцзян өлкәсендә Агкистродон halys Pallas угы җитештергән PLA2 чишелеш конформациясе түгәрәк дихроизм, флюоресенция һәм УВ сеңдерү ярдәмендә өйрәнелде.Эксперименталь нәтиҗәләр күрсәткәнчә, бу ферментның төп чылбыр конформациясе башка төрләрдән һәм төрләрдән булган бер үк ферментка охшаган, скелет конформациясе яхшы җылылыкка каршы булган, һәм кислота мохитенең структур үзгәреше кире кайтарылган.Активатор Ca2 + һәм ферментның кушылуы триптофан калдыклары мохитенә тәэсир итми, Zn2 + ингибиторы киресен ясый.Чишелешнең pH кыйммәте фермент эшчәнлегенә йогынты ясау ысулы югарыдагы реагентлардан аерылып тора.
Елан ууларын PLA2 чистарту процессында ачык күренеш - елан уында ике яки күбрәк PLA2 элитация чокы бар.Бу күренешне түбәндәгечә аңлатырга мөмкин: iso изозимнар булганга;P PLA2ның бер төре төрле молекуляр авырлыктагы PLA2 катнашмаларына полимерлаштырылган, аларның күбесе 9 000 ~ 40 000 диапазонында;P PLA2 һәм еланның башка агулы компонентларының кушылуы PLA2ны катлауландыра;P PLA2дагы амид бәйләнеше гидролизацияләнгәнгә, корылма үзгәрә.① ② common гадәти, берничә очрактан башка, мәсәлән, CrWa / w елан уында PLA2 кебек
Ике ситуация бар: ① һәм ②.Өченче шарт PLA2-да түбәндәге еланнарның агуларында табылды: Оксиранус скутеллатус, Парадемания микролепидота, Ботропс а ^> эр, Палестина еланы, ком еланы, һәм коточкыч елан км。
Эш нәтиҗәләре elect электрофорез вакытында PLA2 миграция тизлеген үзгәртә, ләкин аминокислота составы үзгәрми.Пептидлар гидролиз белән өзелергә мөмкин, ләкин, гадәттә, алар әле дә диффид бәйләнешләре белән бәйләнгән.Көнчыгыш чокырның уты PLA2ның ике төрен үз эченә ала, алар тиешенчә a һәм p PLA2 тибы.Бу ике төр PLA2 арасындагы аерма бер аминокислота, ягъни бер PLA2 молекуласындагы глютамин икенче PLA2 молекуласында глютамик кислотасы белән алыштырыла.Бу аерманың төгәл сәбәбе ачык булмаса да, гадәттә ул PLA2 дезинизациясе белән бәйле дип санала.Әгәр дә Палестина елан уында PLA2 чиста угы белән җылы сакланса, аның фермент молекулаларындагы соңгы төркемнәр элеккегә караганда күбрәк булачак.Елан зәһәреннән изоляцияләнгән C PLA2-ның ике төрле N-терминалы бар, һәм аның молекуляр авырлыгы 30000. Бу күренеш PLA2-ның асимметрик димеры аркасында булырга мөмкин, ул PLA2 формалашкан симметрик димерга охшаган, көнчыгыш бриллиант бөртеге уында. һәм көнбатыш бриллиант.Азия кобра күп төрләрдән тора, аларның кайберләре классификациядә бик төгәл түгел.Мәсәлән, элек Кобра Тышкы Каспий төрләре дип аталган нәрсә хәзер танылды
Аны Тышкы Каспий диңгезе Кобра дип атарга кирәк.Төрле төрләр күп булганга һәм алар бергә кушылганга, елан уының составы төрле чыганаклар аркасында бик нык үзгәрә, һәм PLA2 изозимнары да зур.Мәсәлән, кобра угы
Ким дигәндә 9 төр PLA2 изозимы r ^ ll төрендә, һәм Каспий кобра төрләре агуларында 7 төр PLA2 изозимы табылды.Дуркин һ.б..Гомумән алганда, кобра ууның PLA2 активлыгы бик күп, күп изозимнар бар.PLA2 эшчәнлеге һәм елан уының изозимнары уртача.Мамба угы һәм Rtlesnake угы PLA2 активлыгы бик түбән яки PLA2 активлыгы юк.Диңгез елан агуларының PLA2 активлыгы да түбән.
Соңгы елларда, елан агулыгында PLA2ның актив роман формасында барлыгы турында хәбәр ителмәгән, мәсәлән, көнчыгыш ромбофора еланнары (С. елан уында А тибы һәм P PLA2 тибы бар, икесе дә бер үк субуниталардан тора) , һәм димераза гына бар
Эшчәнлек.Шен һәм башкалар.шулай ук ферментның актив формасы - елан угы PLA2 димеры гына.Мейкин структураны өйрәнү шулай ук көнбатыш бриллиантлы еланның PLA2 димер формасында барлыгын исбатлый.Пискивор кушылмасы
Ике төрле PLA ^ Ei һәм E2 елан угы бар, аларда dim димер формасында бар, димер актив, һәм аерылган мономер актив түгел.Лу ingинхуа һ.б.(1980) Э. Джаянти һ.б.ның физик һәм химик үзлекләрен һәм реакция кинетикасын өйрәнде.(1989) төп PLA2 (VRVPL-V) елан ууыннан аерылды.PLA2 мономерының молекуляр авырлыгы 10000, ул үлемгә китерүче, антикоагулант һәм шеш эффектларына ия.Фермент PH 4.8 шартларында полимерларны полимерлаштыра ала, һәм полимерлаштыру дәрәҗәсе һәм полимерларның молекуляр авырлыгы температураның артуы белән арта.96 ° C температурада барлыкка килгән полимерның молекуляр авырлыгы 53 100, һәм бу полимерның PLA2 активлыгы икегә арта
Пост вакыты: 18-2022 ноябрь